Mario Kart 64 (Japonca: マリオカート64 Mario Kāto Rokujūyon), 1996 yılında Nintendo tarafından geliştirilen karting yarış video oyunudur. Oyun, Mario Kart serisinin ikinci oyunu olup 14 Aralık 1996 tarihinde Japonya ve 1997'de diğer ülkelerde Nintendo 64 için piyasaya sürüldü.
Orijinaldeki değişiklikler, parça tasarımı için çokgen tabanlı gerçek 3D bilgisayar grafiklerine geçiş ve dört oyuncu desteğinin dahil edilmesini içermektedir. Oyuncular, rakiplerine zarar verebilecek veya kullanıcıya yardımcı olabilecek çeşitli pistlerde yarışan Mario serisi karakterleri yönetmektedir. Üç boyutlu grafiğe geçiş, yükselti, köprüler, duvarlar ve çukurlardaki değişiklikler gibi orijinal oyunun Mode 7 grafikleriyle mümkün olmayan iz özellikleri için mümkün hale getirdi. Ancak, karakterler ve öğeler 2D önceden oluşturulmuş spritelar olarak kaldı.
Mario Kart 64 2003 yılında Çin'de iQue Player için ve daha sonra sırasıyla 2007 ve 2016'da Wii ve Wii U için Virtual Console oyunu olarak piyasaya sürüldü.